La FLIM (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy) rappresenta il nuovo paradigma della microscopia a scansione laser in fluorescenza, consentendo la misurazione, oltre alla intensità e al colore del segnale di fluorescenza, anche del tempo medio di decadimento (noto come fluorescence lifetime) della fluorescenza all’interno di campioni sia biologici che non. In aggiunta alle informazioni di tipo spaziale e strutturale (imaging) che un microscopio a scansione laser può fornire, la tecnologia FLIM è in grado di restituire informazioni di tipo funzionale sul campione. Il fluorescence lifetime dei fluorofori è alterato dai cambiamenti del micro-ambiente cellulare pertanto i dati FLIM possono essere correlati sia con varie proprietà molecolari dell’ambiente subcellulare, ma sia anche con parametri quali la concentrazione, il pH e/o la presenza di specifiche interazioni molecolari.

La quinta edizione della Scuola di Microscopia si è incentrata sulla comprensione dei principi ottici e delle applicazioni della microscopia FLIM, combinata con tecniche di imaging standard come la microscopia confocale, per ottenere miglioramenti nella risoluzione spaziale e temporale. Ciò facilita l’imaging subcellulare dettagliato con specificità molecolare.